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基于不同沉淀方法检测小鼠心脏组织中S-棕榈酰化蛋白

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【作者】 程炜占方玲李水明杨静波王勇刘宁

【Author】 CHENG Wei;ZHAN Fang-Ling;LI Shui-Ming;YANG Jing-Bo;WANG Yong;LIU Ning;Central Laboratory,the Second Hospital of Jilin University,Key Laboratory of Zoonosis Research,Ministry of Education;College of Life and Ocean Science,Shenzhen University;

【通讯作者】 王勇;刘宁;

【机构】 吉林大学第二医院中心实验室教育部人兽共患病研究重点实验室深圳大学生命与海洋科学学院

【摘要】 酰基-生物素置换法(Acyl-biotinyl exchange,ABE)是利用生物素取代棕榈酸,进而对棕榈酸修饰的蛋白进行标记检测的方法,是检测S-棕榈酰化蛋白质的常用方法。本研究比较了ABE法中丙酮沉淀与甲醇-氯仿沉淀两种方法对S-棕榈酰化蛋白检测的影响,并对小鼠心脏组织中S-棕榈酰化修饰蛋白进行整体分析,进一步丰富S-棕榈酰化蛋白质的相关研究。首先用N-乙基马来酰亚胺(NEM)对小鼠心脏组织中蛋白质分子上的游离巯基进行封闭,再利用巯基反应性生物素化试剂(HPDP-Biotin)对羟胺(HA)切割后新产生的半胱氨酸巯基进行生物素标记,可检测出小鼠心脏组织中S-棕榈酰化修饰的蛋白。在此反应过程中,均通过蛋白沉淀法除去未反应的NEM、HA及HPDP-Biotin。基于不同沉淀方法对小鼠心脏组织总蛋白中的S-棕榈酰化蛋白进行标记后,利用链霉亲和素修饰琼脂糖珠对已标记上生物素的S-棕榈酰化蛋白进行富集,利用质谱检测分析。本研究共鉴定出50种S-棕榈酰化蛋白,其中丙酮沉淀实验组鉴定出23种S-棕榈酰化蛋白,甲醇-氯仿沉淀实验组鉴定出37种S-棕榈酰化蛋白,两组均鉴定出的蛋白有10种,不同的沉淀方法交叉互补使用可使鉴定结果更加丰富、可靠。

【关键词】 心脏S-棕榈酰化蛋白沉淀质谱
【基金】 国家自然科学基金项目(No.81472030);吉林省科技厅项目(No.20180101267JC)资助~~
【所属期刊栏目】 研究报告 (2019年01期)
  • 【DOI】10.19756/j.issn.0253-3820.181619
  • 【分类号】R446.1
  • 【下载频次】18
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