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环境化学物雄激素干扰活性检测方法的建立

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【作者】 孙宏司朝宗甄世祺陈晓东陈连生

【Author】 SUN Hong,SI Chao-zong,ZHEN Shi-qi,CHEN Xiao-dong,CHEN Lian-sheng(Jiangsu Province Center for Disease Prevention and Control,Nanjing 210009,China)

【机构】 江苏省疾病预防控制中心东南大学医学院

【摘要】 目的:建立雄激素受体(AR)介导的荧光素酶(Luc)报告基因试验方法,为化学物拟/抗雄激素活性的检测提供研究工具。方法:构建受雄激素反应元件调控的荧光素酶报告基因质粒pMMTV-Luc,将该质粒与表达AR的质粒AR/pcDNA3.1和阳性对照质粒phRL-tk共转染CV-1细胞,建立AR报告基因试验。以5α-双氢睾酮(5α-DHT)为阳性对照检测该方法的筛选效率。CV-1转染后用受试化学物染毒,根据Luc表达的变化,判断化学物的雄激素干扰活性。结果:5α-DHT对共转染三种质粒的CV-1的诱导作用表现为:10-10M的5α-DHT显著诱导Luc的表达,10-7M时达最大值,诱导倍数为61.83倍,计算其半数效应浓度EC50为3.65 nM。糖皮质激素受体(GR)激动剂地塞米松(dexamethasone)不诱导Luc的表达。AR拮抗剂氟他胺(flutamide)在10-7M~10-5M浓度范围内显著拮抗1nM的5α-DHT诱导的Luc的表达,其半数抑制浓度(IC50)为3.49μM。BPA在10-6M和10-5M时能拮抗1 nM 5α-DHT诱导的Luc的表达,其IC50为2.14μM。结论:本研究建立的AR报告基因试验具有较高的灵敏度和特异性,化学物BPA具有抗雄激素活性。

【基金】 国家自然科学基金(30901222)
【所属期刊栏目】 专题论著 (2011年01期)
  • 【分类号】R114
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】168
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