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酵母ATG8与PMT1双基因缺失菌株的构建及鉴定

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【作者】 崔红晶袁源陈亚芹邱堃佩赵炜

【Author】 CUI Hong-jing;Institute of Aging Research,Guangdong Medical University;

【通讯作者】 赵炜;

【机构】 广东医科大学衰老研究所广东省医学分子诊断重点实验室东莞市衰老与抗衰老重点实验室

【摘要】 目的构建自噬相关ATG8与蛋白质O-甘露糖转移酶1(PMT1)双基因缺失酵母菌株。方法一步基因置换法构建ATG8基因缺失菌株(BY4741 atag8::LEU2);通过将不同配型的酵母细胞杂交、显微镜下四分体拆分,平板印记、缺陷型培养基筛选等方法,构建ATG8和PMT1双基因缺失菌株(BY4742 agt8::LEU2 PMT1::URA3);PCR鉴定阳性克隆基因组DNA。结果 ATG8基因缺失菌株电泳条带为2759 bp和980 bp,ATG8和PMT1双基因缺失菌株电泳条带分别为2759 bp,980bp,1630 bp和731 bp。四分体拆分实验发现ATG8基因缺失酵母细胞形成较小的单克隆。结论成功构建ATG8基因缺失菌株和ATG8与PMT1双基因缺失菌株;缺失ATG8基因酵母细胞形成较小的单克隆。

【关键词】 酿酒酵母自噬甘露糖基化复制性寿命
【基金】 国家自然科学基金(31701050);广东省医学科学技术研究基金(A2016257);东莞市医疗卫生科技计划一般项目(2016105101289)
【所属期刊栏目】 论著 (2018年04期)
  • 【DOI】10.13799/j.cnki.mdjyxyxb.2018.04.001
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】58
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