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中国人MBL基因编码区的克隆与原核表达

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【作者】 吴志聪张庶民王一飞骆鹏贾天军

【Author】 WU Zhi-cong△,ZHANG Shu-min,WANG Yi-fei,e t al ( △National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biologi cal Products,Beijing 100050,China)

【机构】 中国药品生物制品检定所血清室,中国药品生物制品检定所血清室,暨南大学生物医药研究开发基地,中国药品生物制品检定所血清室,河北北方医学院中心实验室 北京100050暨南大学生物医药研究开发基地(广州510632),北京100050,广州510632,北京100050,张家口075029

【摘要】 目的克隆中国人MBL基因编码区序列,并在原核细胞中表达。方法提取肝总RNA,RT-PCR扩增MBL编码区序列,并克隆到pGEM-T-easy载体上,再亚克隆到pET-30(a)上。诱导表达重组MBL,并通过SDS-PAGE检测表达情况,表达蛋白经初步纯化后,用ELISA及点杂交试验检测其免疫原性。结果克隆得到长747bp的MBL编码区序列,与GenBank中的MBL序列同源性在99%以上。重组MBL相对分子质量约为36000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白量的20%左右,表达蛋白经初步纯化,纯度可达95%以上。ELISA检测显示重组MBLA490值与阴性对照差异有显著意义(10倍以上),点杂交检测结果为阳性。结论已成功克隆中国人MBL基因的编码区序列,并在大肠杆菌中表达,表达产物与天然MBL具有相似的免疫原性。

【基金】 “八六三”博士基金2003AA2Z3509;河北省自然科学基金300377
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2005.04.5.wuzhc.001
  • 【分类号】R346
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】88
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