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LKB1(Thr336)磷酸化多克隆抗体的制备及其应用

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【作者】 任艳敏黄蓓魏浩赖柳静

【Author】 REN Yan-min,HUANG Bei,WEI Hao,et al(School of Life Sciences,Anhui University,Hefei 230039,China)

【机构】 安徽大学生命科学院生物科学系

【摘要】 目的制备LKB1(Thr336)磷酸化多克隆抗体,并以其检测细胞中LKB1的表达。方法用生物信息学方法选取LKB1Thr336位点附近10个氨基酸,且使Thr336位点磷酸化,并铰链到BSA上。以此为抗原免疫家兔,制备抗血清,纯化后通过ELISA法检测抗体效价,Westernblot法检测抗体特异性,并用LKB1抗体和p-LKB1(Thr336)抗体分别检测正常细胞及肿瘤细胞中LKB1的表达。结果纯化后的p-LKB1(Thr336)抗体效价为1∶1000;LKB1抗体不仅识别His-LKB1蛋白,而且识别p-LKB1(Thr336)抗原,而p-LKB1(Thr336)抗体仅识别p-LKB1(Thr336)抗原;在正常细胞HL7702和HEK293中,LKB1表达较多,而在HeLa细胞中,LKB1基本没有表达;在这3种细胞中,p-LKB1(Thr336)基本没有表达;在肿瘤细胞S180、COS-7和Caco2中,LKB1和p-LKB1(Thr336)均有表达,p-LKB1表达相对较多。结论已制备了特异性的p-LKB1(Thr336)多克隆抗体,LKB1-Thr336位点的磷酸化可能是某些肿瘤发生的特征,有望成为肿瘤诊断的指标之一。

【基金】 安徽省教育厅重点项目(2006KJ087A);安徽省中青年学科带头人培养对象经费
【所属期刊栏目】 诊断制品 (2008年11期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2008.11.72.renym.019
  • 【分类号】R392-33
  • 【被引频次】4
  • 【下载频次】186
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