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重组小鼠白细胞介素-17F/His融合蛋白的原核表达、纯化及生物活性

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【作者】 陈凌郭盛郝春莉吴良霞张建华

【Author】 CHEN Ling,GUO Sheng,HAO Chun-li,WU Liang-xia,ZHANG Jian-hua(Department of Pediatrics,Shanghai Sixth People’s Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University,Shanghai 200233,China)

【机构】 上海交通大学附属第六人民医院儿科

【摘要】 目的在大肠杆菌(E.coli)中表达并纯化重组小鼠白细胞介素-17F(rmIL-17F),并鉴定其生物活性。方法经RT-PCR扩增mIL-17f基因片段,定向插入原核表达载体pET28a,构建重组表达质粒pET28a/mIL-17f,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化rmIL-17F/His融合蛋白,Western blot鉴定其反应原性。以纯化复性的rmIL-17F滴鼻干预小鼠,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠肺组织IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测小鼠外周血IL-17F、IL-4和IFNγ的水平。结果扩增的mIL-17f基因DNA序列与GenBank中登录的mIL-17f基因序列一致,所构建的重组表达质粒pET28a/mIL-17f构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为19000,主要以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组蛋白纯度约为95%,具有良好的反应原性,经黏膜给药后,可促进小鼠肺组织中IL-6 mRNA的表达,并提高小鼠血清中IL-4和IFNγ的水平。结论已成功地在大肠杆菌中高效表达并纯化了具有生物学活性的rmIL-17F,为进一步研究IL-17F的功能奠定了基础。

【基金】 上海市自然科学基金资助项目(10ZR1423000)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2010年07期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2010.07.6.chenl.008
  • 【分类号】R392
  • 【被引频次】7
  • 【下载频次】191
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