节点文献

甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒的制备

免费订阅

【作者】 李利杨秀云邹墅张雪梅李晓波李玉香吴东林李静杨文冲杜丽娜李勇

【Author】 LI Li△,YANG Xiu-yun,ZOU Shu,ZHANG Xue-mei,LI Xiao-bo,LI Yu-xiang,WU Dong-lin,LI Jing,YANG Wen-chong,DU Li-na,LI Yong(△Changchun Brother Biotech Co.Ltd,Changchun 130062,China)

【机构】 长春博德生物技术有限责任公司吉林大学第一临床医院感染症科长春生物制品研究所吉林省疾病预防控制中心

【摘要】 目的制备甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒,并进行验证。方法采用磁珠法从甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品中提取病毒RNA,逆转录合成cDNA。根据NCBI最新公布的大流行甲型H1N1流感病毒(2009)基因序列,设计针对编码基质蛋白M基因的引物和探针,检测甲型流感病毒;设计针对血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因特异性的引物和探针,检测甲型H1N1流感病毒;同时针对人的RNaseP基因设计用于内部控制的引物和探针。所有探针均为Taqman探针,5’端标记FAM,3’端标记BHQ1。对最佳荧光PCR反应条件进行优化,在此基础上组装成甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒,对其特异性、灵敏度、精密性和稳定性进行验证。与市售试剂盒的检测结果进行对比,并对63份临床甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品进行检测。结果设计的PCR引物及探针能对甲型H1N1流感病毒进行准确检测,与流感病毒的其他型和亚型无交叉反应;试剂盒的灵敏度为0.004个血凝素单位;试验内变异系数小于2.5%,批间变异系数小于5%;试剂盒放置-20℃保存,稳定性良好;检测20份甲型H1N1流感疑似患者咽拭子样品的结果与市售试剂盒一致;检测63份流感疑似患者咽拭子样品,其中大流行甲型H1N1流感病毒阳性36份,普通甲型流感病毒阳性5份。结论所制备的甲型H1N1流感病毒实时荧光PCR诊断试剂盒具有较高的灵敏度、特异性、精密性和稳定性,可用于目前流行的甲型H1N1流感病毒的快速检测。

【所属期刊栏目】 诊断制品 (2010年07期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2010.07.84.lil.021
  • 【分类号】R440
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】263
节点文献中: 

本文链接的文献网络图示:

浏览历史:
下载历史: