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抗人CD25人鼠嵌合抗体在CHO细胞中的稳定表达及初步鉴定

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【作者】 潘勇兵张爱华胡迪超杨晓明

【Author】 PAN Yong-bing, ZHANG Ai-hua, HU Di-chao, YANG Xiao-ming(Wuhan Institute of Biological Products, Wuhan 430060, China)

【机构】 武汉生物制品研究所

【摘要】 目的在CHO细胞中稳定表达抗人CD25人鼠嵌合抗体,并对抗体活性进行初步鉴定。方法采用脂质体法将嵌合抗体真核表达质粒pOptiVEC-H和pcDNA3.3-L共转染CHO-DHFR-细胞,通过去除HT和在培养基中加入500μg/ml的Geneticine进行阳性克隆的筛选,有限稀释法对阳性克隆进行亚克隆,通过在培养基中加入浓度逐步增加的MTX提高克隆的抗体表达量。采用流式细胞术(FCM)检测嵌合抗体的抗原结合活性及人抗体重链Fc段、轻链κ链;提取细胞基因组进行PCR鉴定;抗体经超滤浓缩后,采用蛋白G亲和纯化法进行纯化,并进行Westernblot分析;体外连续培养细胞株2个月及冻存、复苏后,采用ELISA法检测抗体分泌的稳定性。结果获得稳定分泌嵌合抗体的细胞株1C1,ELISA检测抗体表达量为103ng/ml;PCR结果表明,表达的质粒已整合入细胞基因组中;FCM及Westernblot结果显示,嵌合抗体含有人抗体重链Fc段及轻链κ链,且保留了鼠抗体V区的抗原结合特异性;经蛋白G亲和纯化后,获得抗体220μg,纯度>97%;体外连续培养细胞株2个月及冻存、复苏后,抗体分泌保持稳定。结论获得了稳定表达人CD25人鼠嵌合抗体的CHO细胞株,其具有鼠源抗体的抗原结合特异性及人抗体的恒定区。

【关键词】 CD25嵌合抗体CHO细胞稳定表达
【所属期刊栏目】 基础研究 (2010年10期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2010.10.4.panyb.001
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】194
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