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采用卡介苗结核蜡酸合酶启动子构建分枝杆菌穿梭表达质粒

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【作者】 曾瀚庆吕琳梅浙川王丕龙娄世锋

【Author】 ZENG Han-qing, LV Lin, MEI Zhe-chuan, WANG Pi-long, LOU Shi-feng (The Second Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China)

【机构】 重庆医科大学附属第二医院重庆医科大学附属第一医院消化内科

【摘要】 目的采用卡介苗(BCG)结核蜡酸合酶(Mycocerosic acid synthase,Mas)启动子,将分枝杆菌穿梭质粒pJEM11改建为分枝杆菌穿梭表达质粒。方法 PCR扩增BCG基因组中Mas启动子,定向克隆至质粒pJEM11的ApaⅠ与SnaBⅠ位点之间,构建分枝杆菌穿梭表达质粒pJMas。将幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)UreB基因克隆至pJMas质粒,转化耻垢分枝杆菌(Mycobacteria smegmatis,M.smegmatis)mc2155,SDS-PAGE检测重组UreB蛋白在M.smegmatis mc2155中的表达,Western blot分析其反应原性。结果克隆的Mas启动子序列与结核杆菌H37Rv株的Mas启动子序列(gi31619628)同源性达99%;重组穿梭表达质粒pJMas经PCR及双酶切鉴定证明构建正确;UreB基因在M.smegmatis mc2155中成功表达,表达的蛋白可与Hp阳性病人血清发生特异性反应。结论成功构建分枝杆菌穿梭表达质粒pJMas,为构建以耻垢分枝杆菌为载体的多价疫苗奠定了基础。

【基金】 国家自然科学基金资助项目(30371318);重庆市卫生局重点项目(渝卫教[2007]1号文07-1-007)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2010年10期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2010.10.14.zenghq.003
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】49
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