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重组人uPA17-KPI大规模发酵及纯化工艺的建立

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【作者】 赵磊孔宁颜炜群周庆伟

【Author】 ZHAO Lei, KONG Ning, YAN Wei-qun, Zhou Qing-wei(Department of Bioengineering, School of Pharmacy, Jilin University, Changchun 130021, China)

【机构】 吉林大学药学院生物工程教研室

【摘要】 目的建立重组人uPA17-KPI(rhuPA17-KPI)毕赤酵母工程菌在80L发酵罐中的大规模发酵及纯化工艺。方法对工程菌表达rhuPA17-KPI的pH值进行优化。在摇瓶中制备rhuPA17-KPI工程菌种子2L,接种至80L发酵罐中,采用优化的pH值,补料分批培养方式对工程菌进行高密度发酵,控制和优化各种发酵条件,经甲醇诱导48h后结束发酵。将发酵液离心,经SP Sepharose XL阳离子交换层析和SourceTM 30 RPC反相疏水柱层析纯化。结果建立的发酵工艺为:控制发酵温度为28℃,pH值为5.5,溶氧值为25%~30%之间,在酵母细胞湿重达到190g/L时开始甲醇诱导表达,诱导30h,rhuPA17-KPI的分泌达高峰,为300mg/L发酵液。发酵上清经阳离子交换层析和反相疏水层析纯化后,获得纯度为95%以上的rhuPA17-KPI,产量为180mg/L,回收率为60%。结论已建立了rhuPA17-KPI毕赤酵母工程菌在80L发酵罐中的大规模发酵及纯化工艺,为其产业化及临床应用奠定了基础。

【关键词】 重组人uPA17-KPI毕赤酵母发酵纯化
【基金】 国家高技术研究发展计划(863计划)(2006AA020905)
【所属期刊栏目】 治疗制品 (2010年10期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2010.10.66.zhaol.010
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】92
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