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人表皮蛋白质组双向电泳的建立及技术的改进

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【作者】 龙亭黄欣高永良陈爱军李文静

【Author】 LONG Ting, HUANG Xin, GAO Yong-liang, CHEN Ai-jun, LI Wen-jing(Department of Dermatology, The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China)

【机构】 重庆医科大学附属第一医院皮肤科重庆医科大学中医药学院中药方剂教研室

【摘要】 目的建立人表皮蛋白质组双向电泳(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)图谱,并改进技术条件,为人表皮蛋白质组学的研究提供技术参考。方法以2种不同的方法提取人表皮总蛋白,使用固相pH梯度胶条进行2-DE,并对样品上样量、等电聚焦(Isoelectric focusing,IEF)参数及硝酸银染色等关键步骤进行改进,采用PDQuest8.0软件分析比较2-DE图谱。结果采用液氮研磨后再裂解的方法制备的人表皮总蛋白,以250μg上样,以改进的IEF参数和硝酸银染色步骤获得的2-DE图谱清晰、分辨率高、重复性好,匹配率为85.5%。分离出蛋白质点551±31个,均匀分布在相对分子质量14000~100000、pH5~8之间,比常规方法所获得的2-DE图谱蛋白点明显增多(P<0.05)。结论已建立了人表皮蛋白质组2-DE图谱,改进的方法比常规方法更适用于人表皮蛋白质组学的研究。

【关键词】 表皮双向电泳蛋白质组学
【基金】 中华医学会-欧莱雅中国人健康皮肤研究项目(S2008050627)
【所属期刊栏目】 实验技术 (2010年10期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2010.10.100.longt.013
  • 【分类号】Q503
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】109
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