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重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38在大肠杆菌中的表达及其细胞毒性

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【作者】 彭超李岩松何晶龙郭德军

【Author】 PENG Chao,LI Yan-song,HE Jing-long,GUO De-jun(College of Food,Heilongjiang Bayi Agricultural Uni-versity,Daqing 163319,Heilongjiang Province,China)

【机构】 黑龙江八一农垦大学食品学院吉林大学人兽共患病研究所

【摘要】 目的 在大肠杆菌中表达、纯化重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38,并检测其细胞毒性。方法以PHis-hIL6(T22)-PE38质粒为模板,PCR扩增hIL6(T22)-PE38基因,插入表达载体pET-28a(+)的NcoⅠ和XhoⅠ多克隆位点,构建重组表达质粒,分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)、Rosettablue(DE3)和BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,并对表达条件进行优化。表达产物经亲和层析纯化后,检测其细胞毒性。结果重组表达质粒pET-28a-hIL6(T22)-PE38经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组毒素相对分子质量约56 000,在大肠杆菌Rosettablue(DE3)中表达量最高。最适诱导表达条件为:1 mmol/L IPTG 28℃诱导4 h。重组毒素能选择性地杀伤人骨髓瘤细胞U266和鼠骨髓瘤细胞SP2/0,体外对U266和SP2/0细胞的IC50分别为0.5~1.0和1.0~1.5μg/ml。结论重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38在大肠杆菌中成功获得可溶性表达,纯化的蛋白可明显选择性杀伤U266和SP2/0细胞。

【所属期刊栏目】 基础研究 (2011年01期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2011.01.20.pengch.011
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】105
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