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内源性血管生成抑制因子Arresten基因原核表达条件的优化

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【作者】 唐海英郑金平陈显久解军

【Author】 TANG Hai-ying,ZHENG Jin-ping,CHEN Xian-jiu,XIE Jun(Department of Nutrition and Food Hygiene,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China)

【机构】 山西医科大学卫生营养与食品卫生学教研室山西医科大学卫生毒理学教研室山西医科大学生化和分子生物学教研室

【摘要】 目的 优化内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达条件。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA,RT-PCR扩增Arresten基因,构建重组表达质粒pBV220-Arr,分别转化感受态E.coli JM109、DH5α、BL21、BL21(DE3),诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物,筛选出最优表达菌种,并对其菌体培养温度和时间、诱导温度和时间及溶解氧量进行优化。结果重组表达质粒pBV220-Arr经酶切及测序证明构建正确,重组表达质粒在E.coli JM109、DH5α、BL21、BL21(DE3)4种菌中诱导2和4 h,均能表达出Arresten蛋白,诱导表达4 h,E.coli BL21(DE3)目的 蛋白表达量最高,湿菌重也明显大于其他菌种。E.coli BL21(DE3)/pBV220-Arr的最佳表达条件为:在500 ml培养瓶中加入100 ml LB氨苄阳性培养基,菌体于30℃培养4 h后,再42℃诱导表达4 h。结论优化了Arresten基因工程菌的表达条件,为重组Arresten蛋白的大量表达提供了参考。

【关键词】 Arresten原核细胞基因表达大肠杆菌
【基金】 山西省科技攻关项目(042082);山西省高校产业化项目(20080017);山西省山西医科大学校青年基金(02200817)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2011年01期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2011.01.58.tanghy.027
  • 【分类号】R73-3
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】127
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