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NIRF蛋白的原核表达及纯化

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【作者】 杨艳金方敏钱冠华段昌柱

【Author】 YANG Yan,JIN Fang-min,QIAN Guan-hua,DUAN Chang-zhu (Department of Cell Biology and Genetics,Molecular Medicine & Cancer Research Center,Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China)

【机构】 重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心

【摘要】 目的 原核表达NIRF基因,并纯化NIRF蛋白。方法 PCR扩增全长NIRF基因,克隆入原核表达质粒pGEX-4T-1中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用GST 4B球珠亲和纯化目的蛋白。结果重组表达质粒pGST-NIRF经酶切鉴定证明构建正确。22℃条件下培养,菌体A600值达1.8时,加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导7 h,能使GST-NIRF在上清中大量表达;纯化的重组GST-NIRF蛋白纯度达85%以上,可与GST抗体和NIRF抗体发生特异性结合。结论已成功在大肠杆菌中表达了GST-NIRF蛋白,纯化的蛋白可用于NIRF的生物功能活性研究。

【关键词】 NIRFGST标签原核细胞基因表达纯化
【基金】 国家自然科学基金资助项目(30872248);重庆市科技委员会资助(CSTC,2008BB5400);重庆市教育委员会资助(KJ080326)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2011年01期)
  • 【DOI】10.13200/j.cjb.2011.01.62.yangy.003
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】5
  • 【下载频次】162
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