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重组小肿瘤坏死因子α拮抗剂的表达、纯化及其生物学活性

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【作者】 张明义黄岚李泽锋郭美锦周华

【Author】 ZHANG Ming-yi;HUANG Lan;LI Ze-feng;GUO Mei-jin;ZHOU Hua;Wuxi MTLH Biotechnology Co. Ltd.;

【机构】 无锡麦涛岚华生物技术有限公司华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

【摘要】 目的表达能够与肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)结合的低相对分子质量重组小肿瘤坏死因子α拮抗剂(small TNFαantagonist,STNFαA),并对纯化后蛋白的生物学活性进行检测。方法利用计算机模拟优化设计出与TNFR1具有较高结合力的STNFαA氨基酸序列,根据大肠埃希菌"密码偏爱性"设计合成目的基因,插入质粒pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET28-STNFαA,转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定后,采用Ni Sepharose 6 Fast Flow层析介质进行亲和纯化,纯化产物经SDSPAGE、HPLC分析;采用MTT法检测重组蛋白的生物学活性。结果重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;重组蛋白STNFαA相对分子质量约17 000,表达量约占菌体总蛋白的25%,以包涵体形式存在,纯度大于95%;重组蛋白STNFαA对TNFα的抑制作用呈浓度依赖性。结论已成功表达了STNFαA,该蛋白具有抑制TNFα介导的细胞毒生物活性作用,为全新的TNF拮抗剂的新药研究奠定了基础。

【基金】 上海市重点项目(12DZ1931703)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2013年09期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.000131
  • 【分类号】R944
  • 【下载频次】60
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