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小鼠CX3CR1基因重组慢病毒过表达质粒的构建及鉴定

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【作者】 刘芳李法琦

【Author】 LIU Fang;LI fa-qi;Department of Geriatrics,The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University;

【机构】 重庆医科大学附属第一医院老年病科

【摘要】 目的构建小鼠CX3CR1基因重组慢病毒过表达质粒,并对其进行鉴定。方法根据GenBank登录的小鼠CX3CR1基因序列设计引物,PCR扩增CX3CR1基因,将其定向克隆至载体pUbi-MCS-EGFP,经菌落PCR和序列测定,将鉴定正确的重组慢病毒质粒转染293T细胞,显微镜下观察病毒的绿色荧光,并根据荧光表达情况计算转染病毒滴度。结果 CX3CR1基因PCR产物经琼脂凝胶电泳鉴定,可见约1 000 bp的目的条带;经菌落PCR鉴定及序列测定,重组慢病毒过表达质粒pUbi-MCS-CX3CR1-EGFP构建正确,转染293T细胞48 h后,可见绿色荧光表达,经计算,病毒滴度为2×108TU/ml。结论成功构建小鼠CX3CR1基因重组慢病毒过表达质粒pUbi-MCS-CX3CR1-EGFP,为研究慢病毒介导的CX3CR1基因转染骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)及其归巢能力奠定了基础。

【关键词】 CX3CR1基因慢病毒表达载体
【所属期刊栏目】 基础研究 (2013年09期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.000142
  • 【分类号】R341
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】137
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