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HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性

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【作者】 张占东徐静李计来李树香周亚王欣怡刘敬张云涛

【Author】 ZHANG Zhan-dong;XU Jing;LI Ji-lai;LI Shu-xiang;ZHOU Ya;WANG Xin-yi;LIU Jing;ZHANG Yun-tao;National Vaccine & Serum Institute;

【机构】 北京生物制品研究所有限责任公司第三研究室

【摘要】 目的原核表达、纯化HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白,并分析其免疫原性。方法生物信息学方法预测鼠血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的B细胞抗原表位,采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)法将VEGF抗原表位基因插入到HBcAg基因的免疫优势区内,合成HBcAg-VEGF基因序列,克隆至原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-HBcAg-VEGF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经羟基磷灰石CHT层析、Sephacryl S-400 HR凝胶过滤层析纯化后,与A(lOH)3佐剂混合,分别于第0、7、14、21天经肌肉免疫BALB/c小鼠1次,第28天采血,ELISA法检测血清中抗VEGF抗原表位抗体,VEGF受体结合抑制试验筛选具有良好免疫原性的VEGF优势抗原表位。对筛选出的优势抗原表位融合蛋白进行表达及纯化条件的优化。结果生物信息学软件预测了6个VEGF的B细胞抗原表位;6个重组表达质粒经菌落PCR及测序证实构建正确;表达的HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白相对分子质量为14 400~20 100,纯度均在85%以上,除HBcAg-VEGF3以单体形式存在、不形成颗粒外,其他融合蛋白均能形成VLP;各组HBcAg-VEGF融合蛋白免疫小鼠后,均刺激机体产生了针对VEGF抗原表位肽的特异性抗体,其中HBcAg-VEGF1组抗体水平最高,且抑制VEGF与VEGFR结合的能力最强;采用优化的条件表达、纯化的HBcAg-VEGF1抗原表位融合蛋白纯度达95%以上。结论筛选得到的HBcAg-VEGF1抗原表位融合蛋白显示出较好的免疫原性,为进一步研究其抗肿瘤效应奠定了基础。

【所属期刊栏目】 治疗性制剂 (2013年09期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.000143
  • 【分类号】R392
  • 【被引频次】3
  • 【下载频次】204
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