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人叉头转录因子O亚型3基因重组表达质粒的构建及鉴定

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【作者】 段志青段云青雷焕贵胡凝珠罗婷李虹娟王霄胡云章

【Author】 DUAN Zhi-qing;DUAN Yun-qing;LEI Huan-gui;HU Ning-zhu;LUO Ting;LI Hong-juan;WANG Xiao;HU Yun-zhang;Institute of Medical Biology,Chinese Academy of Medical College and Peking Union Medical College,Yunnna Key Laboratory of Vaccine Research & Development on Severe Infectious Disease;

【机构】 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室山西农业大学文理学院昆明医科大学生物所

【摘要】 目的构建人叉头转录因子O亚型3(forkhead box class O3,FOXO3)基因重组表达质粒,并检测其在人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的表达。方法利用3对引物从人cDNA中分别扩增大小为382、829和891 bp的3个目的片段,胶回收后进行拼接,获得hFOXO3的CDS片段,与pcDNA3.1(+)载体连接,构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-hFOXO3,转染人PBMC,采用Real-time PCR和Western blot分别检测hFOXO3基因mRNA水平及蛋白表达水平。结果重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;转染PBMC后,pcDNA3.1(+)-hFOXO3组hFOXO3基因mRNA的水平分别为转染试剂对照组和pcDNA3.1(+)组的2 599.7和2 377.8倍,且差异均有统计学意义(P<0.001);pcDNA3.1(+)-hFOXO3组hFOXO3蛋白的表达水平分别为转染试剂对照组和pcDNA3.1(+)组的2和1.8倍,且差异均有统计学意义(P<0.01);而转染试剂对照组和pcDNA3.1(+)组间hFOXO3基因mRNA水平和蛋白的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了pcDNA3.1(+)-hFOXO3重组表达质粒,其在人PBMC中能进行hFOXO3基因mRNA的转录及蛋白的表达,为进一步研究hFOXO3的生物学功能及其作用机制奠定了基础。

【基金】 国家高技术研究发展计划(863计划)“新型疫苗佐剂的研发及其应用研究”(2012AA02A406);云南省创新团队“中国医学科学院医学生物学研究所新型疫苗佐剂应用研究省创新团队”(2011CI140)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2014年03期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.000221
  • 【分类号】R392.1
  • 【下载频次】76
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