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融合蛋白GST-PADI4可溶性表达条件的优化及纯化

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【作者】 柴政斌张更林王学政韩金祥

【Author】 CHAI Zheng-bin;ZHANG Geng-lin;WANG Xue-zheng;HAN Jin-xiang;Key Laboratory for Biotech-Drugs of the Ministry of Health,Key Laboratory for Rare and Uncommon Disease of Shandong,Shandong Academy of Medical Sciences,Shandong Medical Biotechnology Center;

【机构】 卫生部生物技术药物重点实验室山东省罕少见病重点实验室山东省医药生物技术研究中心山东省医学科学院济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院

【摘要】 目的优化融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达条件,并对蛋白进行纯化。方法对融合蛋白GST-PADI4工程菌的诱导温度(16、20、25、30、37℃)、诱导剂IPTG浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1 mmol/L)、诱导时菌液A600值(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0)、诱导时间(8、12、16、20、24 h)进行优化,分析融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达情况;按优化的表达条件进行大量表达后,采用Sepharose 4B亲和层析柱对融合蛋白进行纯化。结果在16℃,菌液A600值约为0.4时,以0.1 mmol/L IPTG诱导12 h,融合蛋白GST-PADI4有较高的可溶性表达;纯化的融合蛋白纯度为91%。结论优化了融合蛋白GST-PADI4的可溶性表达条件,并获得了高纯度的可溶性融合蛋白,为后续研究PADI4蛋白的功能奠定了基础。

【所属期刊栏目】 技术方法 (2014年03期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.000201
  • 【分类号】Q786
  • 【被引频次】4
  • 【下载频次】255
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