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柯萨奇病毒A组16型cDNA感染性克隆的构建

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【作者】 李嘉祺李洪哲郑惠文宁若彤范海涛杨泽宁胡雅洁刘龙丁

【Author】 LI jia-qi;LI Hong-zhe;ZHENG Hui-wen;NING Ruo-tong;FAN Hai-tao;YANG Ze-ning;HU Ya-jie;LIU Long-ding;Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research and Development on Severe Infectious Disease;

【机构】 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

【摘要】 目的构建柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)c DNA感染性克隆。方法提取CA16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长c DNA,插入至TOPO-XL-PCR载体,获得CA16全长c DNA克隆。采用T7聚合酶系统将线性基因组c DNA体外转录出病毒基因组RNA,纯化后转染Vero细胞,获得拯救病毒。通过RT-PCR、基因测序及免疫荧光法对拯救病毒进行鉴定,并对拯救病毒与母本病毒的增殖特性进行比较。结果病毒基因组RNA转染Vero细胞后48 h,可见典型的肠道病毒致细胞病变。拯救病毒经RT-PCR、基因测序和免疫荧光鉴定为CA16,且与母本野生型病毒增殖特性基本一致。结论成功构建了具有感染性的CA16全长c DNA克隆,为研究CA16基因功能和研发CA16新型疫苗奠定了基础。

【基金】 国家自然科学基金(31300143);云南省应用基础研究计划项目(2015FB193)
【所属期刊栏目】 基础研究 (2018年01期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.002045
  • 【分类号】R373
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】119
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