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猪弓形虫循环抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

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【作者】 寇金华杨正涛刘维建高珺珊李建华张西臣宫鹏涛

【Author】 KOU Jin-hua;YANG Zheng-tao;LIU Wei-jian;GAO Jun-shan;LI Jian-hua;ZHANG Xi-chen;GONG Peng-tao;College of Veterinary Medicine, Jilin University;

【机构】 吉林大学动物医学学院

【摘要】 目的建立一种检测猪血清中弓形虫循环抗原(circulating antigen,CAg)的双抗体夹心ELISA法。方法利用抗弓形虫表面抗原3(surface antigen 3,SAG3)的单克隆抗体Anti-A-SAG3-7作为捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗弓形虫SAG3的单克隆抗体Anti-A-SAG3-23作为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并对方法的捕获抗体(1∶400~1∶6 400倍比稀释)、检测抗体(1∶400~1∶12 800倍比稀释)、血清稀释度(1∶10~1∶80倍比稀释)及封闭液的种类(5%脱脂奶粉、10%胎牛血清、5%BSA、1%BSA)进行优化,同时验证该方法的敏感性、特异性及精密性。采用优化后的方法对广东和吉林地区的各94份猪血清样本进行检测。结果双抗体夹心ELISA法的最佳检测条件为:捕获抗体Anti-A-SAG3-7及检测抗体HRP-Anti-A-SAG3-23稀释度均为1∶3 200,封闭液为1%BSA,血清稀释度为1∶80。该方法检测两份猪囊虫阳性血清无交叉反应,灵敏度达1∶640,批内及批间的变异系数(CV)均<11%。广东和吉林地区各94份样品的阳性率分别为20.2%(19/94)和11.7%(11/94)。结论该方法具有良好的特异性、敏感性及精密性,可用于猪弓形虫CAg的检测。

【基金】 吉林省科技发展计划项目(20130206023NY);国家公益性行业(农业)科研专项(201303042)
【所属期刊栏目】 技术方法 (2018年01期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.002056
  • 【分类号】S852.4
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】142
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