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重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性检测方法的建立及验证

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【作者】 秦海艳熊颖黄峥乔玉玲陈继军安晨庄超毛晓燕

【Author】 QIN Hai-yan;XIONG Ying;HUANG Zheng;QIAO Yu-ling;CHEN Ji-jun;AN Chen;ZHUANG Chao;MAO Xiao-yan;Lanzhou Institute of Biological Products Co., Ltd.;

【机构】 兰州生物制品研究所有限责任公司第四研究室上海泰因生物技术有限公司

【摘要】 目的建立重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性的检测方法,并进行验证。方法测定3种人淋巴瘤细胞(MC/CAR、HUT78、RAMOS)CD52抗原的表达率,选择CD52表达率最高的作为靶细胞。以系列稀释的重组人源化抗CD52单克隆抗体的参比品和供试品作用表达CD52抗原的人淋巴瘤细胞,FITC标记的兔抗人Ig G结合人淋巴瘤细胞上的重组人源化抗CD52单克隆抗体,流式细胞分析仪测定几何荧光均数。通过四参数方程拟合,计算参比品和供试品的半数有效浓度(EC50)及相对结合活性。并对该方法的专属性、准确性、精密性、线性范围和耐用性进行验证。结果淋巴瘤MC/CAR细胞CD52抗原表达率最高,确定该细胞为靶细胞。CD52抗原与无关抗体不存在特异性结合;重复3次测定不同理论相对结合活性人源化抗CD52单克隆抗体参比品的回收率在97.4%~111.9%之间,相对结合活性及回收率的RSD值均在10%以内;同一实验人员于同一天6次重复检测重组人源化抗CD52单克隆抗体相对结合活性在86.93%~114.42%之间,RSD值在10%以内,3 d内不同实验员分别检测5个效价样品的相对结合活性的RSD在20%以内;在重组人源化抗CD52单克隆抗体理论效价50%~150%范围内,与相对结合活性呈良好的线性,线性回归方程为y=1.045 2 x-1.082,R2为0.992 1;MC/CAR细胞在第28代时仍适用于抗CD52抗体相对结合活性的测定。结论该方法具有良好的特异性、准确性、精密性、线性和耐用性,且操作简便,可用于重组抗CD52抗体抗原结合活性的常规检测。

【基金】 甘肃省科技重大专项(1502FKDA008)
【所属期刊栏目】 技术方法 (2018年01期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.002057
  • 【分类号】R392-33
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】113
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