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丙型肝炎病毒人源单克隆抗体的初步筛选

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【作者】 岳磊李华杨婷谢天宏宋霞孟华清张也谢忠平

【Author】 YUE Lei;LI Hua;YANG Ting;XIE Tian-hong;SONG Xia;MENG Hua-qing;ZHANG Ye;XIE Zhong-ping;Institute of Medical Biology,Peking Union Medical College & Chinese Academy of Medical Science;

【机构】 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所

【摘要】 目的构建天然人源噬菌体抗体库,初步筛选人源抗丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)多肽抗原的单克隆重组噬菌体抗体。方法以健康成人外周血淋巴细胞cDNA为模板,采用PCR技术扩增轻(VL)、重链(VH)可变区基因;重叠PCR法拼接生成单链抗体可变区基因片段(single chain fragment variable,scFv),并克隆至噬菌体载体p CANTAB5e,得到初级抗体库;使用HCV多肽混合抗原,经3轮淘筛富集噬菌体抗体;Phage ELISA法初步筛选HCV重组噬菌体抗体。结果成功构建了天然人源噬菌体抗体库。scFv(VH-κ)库的库容为6.0×10~7 PFU/mL,scFv(VH-λ)库的库容为4.28×10~9 PFU/m L;经初步淘筛,成功获得HCV三级抗体库;Phage ELISA得到了3株候选重组噬菌体抗体。结论初步得到HCV多肽抗原重组噬菌体抗体,为今后进一步筛选高亲和力噬菌体抗体和可溶抗体奠定了基础。

【基金】 云南省应用基础研究计划项目(2016FB037,2013FZ135);协和青年基金(3332016114);中央高校基本科研业务费专项资金(2016ZX350070);中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(2017-12M-2-006)
【所属期刊栏目】 治疗性制剂 (2018年03期)
  • 【DOI】10.13200/j.cnki.cjb.002115
  • 【分类号】R392
  • 【下载频次】87
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