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葡萄DFR蛋白的生物信息学分析及自激活检测

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【作者】 刘海霞温灏宇杨波李晓慧张鹏飞温鹏飞

【Author】 Liu Haixia;Wen Haoyu;Yang Bo;Li Xiaohui;Zhang Pengfei;Wen Pengfei;College of Horticulture, Shanxi Agricultural University;College of Animal Science and Technology, Northwest A&F University;Shanxi Key Laboratory of Germplasm Creation and Utilization with Pomology;

【通讯作者】 温鹏飞;

【机构】 山西农业大学园艺学院西北农林科技大学动物科技学院果树种质创制和利用山西省重点实验室

【摘要】 [目的]生物信息学分析葡萄DFR蛋白的功能结构域和蛋白互作预测,构建DFR酵母双杂交诱饵载体,并检测其自激活活性。[方法]利用NCBI中的CDD分析DFR蛋白保守区域,STRING在线软件对DFR蛋白互作情况进行预测,采用PCR技术扩增出葡萄DFR基因,克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,PEG/LiAc法将阳性质粒pGBKT7-DFR转化至酵母AH109中,通过缺陷型培养基培养进行自激活检测。[结果]DFR蛋白保守区域有NADP结合位点,预测到DFR蛋白与MybPA1蛋白有互作关系。成功构建了诱饵载体pGBKT7-DFR,并且对酵母菌无毒性,对报告基因无自激活功能。[结论]本研究通过生物信息学分析得出,酵母诱饵蛋白表达载体pGBKT7-DFR,可以作为酵母双杂交诱饵载体筛选与DFR相互作用的蛋白,进而对其进行功能性研究。

【关键词】 生物信息学诱饵载体酵母双杂交
【基金】 国家自然科学基金(31372013);山西省科技重点研发(指南)项目(201603D21105)
【所属期刊栏目】 林学与园艺 (2018年12期)
  • 【DOI】10.13842/j.cnki.issn1671-8151.201808031
  • 【分类号】S663.1
  • 【下载频次】195
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