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LV-EGFP-inhba过表达慢病毒载体转染大鼠卵巢颗粒细胞的实验研究

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【作者】 王继东罗爽方政慧

【Author】 Wang Jidong;Luo Shuang;Fang Zheng;Department of Gynecology,Jinan Central Hospital Affiliated to Shandong University;Department of Obstetrics and Gynecology,Suining Central Hospital;

【机构】 山东大学附属济南市中心医院妇科遂宁市中心医院妇产科

【摘要】 目的:构建inhba基因过表达的慢病毒载体(lenti-EGFP-inhba),观察体外转染大鼠卵巢颗粒细胞的有效性。方法:p LVX-EGFP-3FLAG质粒系统经EcoRI酶切使之线性化。inhba基因(NM008380)PCR扩增后同源重组入线性化的表达质粒系统。Western blot法检测表达质粒目的基因表达。将构建成功的慢病毒载体(lenti-EGFP-inhba)转染大鼠卵巢颗粒细胞(MOI=20),检测目的基因表达。结果:PCR扩增产物与目的基因大小吻合,重组质粒系统经转化后获得阳性克隆,转染293T细胞可见EGFP-inhba融合蛋白表达。Western blot获得76k Da分子量大小阳性条带,与融合蛋白分子量大小一致。lentiEGFP-inhba体外转染大鼠卵巢颗粒细胞,倒置荧光显微镜下可见EGFP表达。结论:lenti-EGFP-inhba表达载体成功构建,并可在体外有效转染大鼠卵巢颗粒细胞。

【关键词】 Activin A慢病毒载体转染颗粒细胞
【基金】 山东省医药卫生科技发展计划(No:2016WS0127)
【所属期刊栏目】 论著 (2018年06期)
  • 【DOI】10.13283/j.cnki.xdfckjz.2018.06.005
  • 【分类号】R711
  • 【下载频次】56
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