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棉花GhPAO3基因的CRISPR/Cas9表达载体的构建

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【作者】 朱雪峰田文刚熊显鹏薛飞张莉朱华国

【Author】 ZHU Xue-feng;TIAN Wen-gang;XIONG Xian-peng;XUE Fei;ZHANG Li;ZHU Hua-guo;Key Laboratory of Oasis Eco-agriculture of Xinjiang Production and Construction Corps, College of Agronomy, Shihezi University;

【通讯作者】 朱华国;

【机构】 石河子大学/新疆生产建设兵团绿洲生态农业重点实验室

【摘要】 【目的】研究棉花GhPAO3基因的功能,通过CRISPR/Cas9技术构建棉花GhPAO3基因的基因编辑载体。【方法】筛选合适的两个PAM位点设计引物,在引物中添加接头,重叠延伸PCR,将两个靶标片段连接在一起。通过限制性核酸内切酶BsaⅠ对pRGEB32-7载体进行单酶切,使用一步法连接重叠延伸产物与线性化的pRGEB32-7载体。【结果】使用电击转化法将构建好的棉花GhPAO3基因的基因编辑载体转入农杆菌LBA4404感受态,通过卡那霉素筛选阳性单克隆菌株。【结论】条带大小与预期一致,棉花GhPAO3基因的基因编辑载体构建成功。

【关键词】 棉花CRISPR/Cas9基因编辑GhPAO3
【基金】 国家自然科学基金(31660427);兵团现代农业科技成果转化计划(2015AC007)~~
【所属期刊栏目】 作物遗传育种·种质资源·分子生物学 (2019年02期)
  • 【分类号】Q943.2;S562
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