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异叶天南星查尔酮合成酶和异构酶基因的克隆及蛋白的结构性质分析

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【作者】 张声祥施圆圆王晨凯赵德蕊杨青山马克龙吴家文

【Author】 ZHANG Sheng-xiang;SHI Yuan-yuan;WANG Chen-kai;ZHAO De-rui;YANG Qing-shan;MA Ke-long;WU Jia-wen;Graduate School,Anhui University of Chinese Medicine;Key Laboratory of Xin’an Medicine,Ministry of Education,Anhui University of Chinese Medicine;College of Pharmacy,Anhui University of Chinese Medicine;Synergetic Innovation Center of Anhui Authentic Chinese Medicine Quality Improvement;Anhui Academy of Chinese Medicine;Clinical College of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Anhui University of Chinese Medicine;

【通讯作者】 吴家文;

【机构】 安徽中医药大学研究生院安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室安徽中医药大学药学院安徽道地中药材品质提升协同创新中心安徽省中医药科学院安徽中医药大学中西医结合学院

【摘要】 查尔酮合成酶(CHS)和查尔酮异构酶(CHI)是黄酮类物质生物合成途径中的关键酶,该研究从中药异叶天南星(Arisaema heterophyllum Blume,Ah)转录组数据库中筛选出查尔酮合成酶基因(Ah CHS)和查尔酮异构酶基因(Ah CHI),利用RT-PCR技术克隆了它们的开放阅读框(ORF)部分,并对其编码蛋白Ah CHS和Ah CHI的理化性质、表达及结构特点进行分析。Ah CHS的ORF长度为1 176 bp,编码392个氨基酸的蛋白质;而Ah CHI的ORF长度为630 bp,编码蛋白含209个氨基酸。Ah CHS作为对称同二聚体,N端螺旋互相交换,每个单体由2个亚结构域组成,位于2个亚结构域之间交界处的4个保守的氨基酸残基构成了酶的活性中心; Ah CHI的三级结构采用了开放的β-三明治褶皱,1个大的β折叠片层(β4~β11)和1个α螺旋片层(α1~α7)组成其核心结构,其中β4,β5,α4和α6在不同物种间高度保守,部分疏水氨基酸形成了酶的活性位点。系统进化树分析发现Ah CHS与火鹤花CHS亲缘关系最近;而Ah CHI与紫牡丹CHI亲缘关系最近。表达分析表明编码Ah CHS的基因在根和块茎中的表达量明显比叶多,而编码Ah CHI的基因在块茎部位的表达量最高。该研究为Ah CHS和Ah CHI功能的进一步研究及植物黄酮类化合物生物合成途径的解析提供了基础。

【基金】 中央本级重大增减支项目(2060302);安徽高校自然科学研究重大项目(KJ2018ZD028);安徽省自然科学基金项目(1608085MH177);国家级大学生创新训练项目(201810369050);安徽省留学人员科技活动启动项目(20151x024)
【所属期刊栏目】 分子生药学 (2019年09期)
  • 【DOI】10.19540/j.cnki.cjcmm.20190130.001
  • 【分类号】S567.239
  • 【下载频次】98
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