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1,4苯醌对K562细胞自噬的影响及机制

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【作者】 孙凤梅章梦莹张虹浦跃朴张娟

【Author】 SUN Feng-mei;ZHANG Meng-ying;ZHANG Hong;PU Yue-pu;ZHANG Juan;Key Laboratory of Environmental Medicine Engineering,Ministry of Education,School of Public Health,Southeast University;

【机构】 东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室

【摘要】 [目的]研究1,4苯醌(1,4-BQ)对人慢性髓系白血病K562细胞自噬的影响及其机制。[方法]选择人慢性髓系白血病K562细胞,采用1,4-BQ、自噬早期抑制剂LY294002和自噬晚期抑制剂氯喹(CQ)进行染毒处理,分为对照组、1,4-BQ染毒组(5、10、20μmol/L)、LY294002组(10μmol/L)、CQ组(10μmol/L)、1,4-BQ(20μmol/L)+LY294002(10μmol/L)组和1,4-BQ(20μmol/L)+CQ(10μmol/L)组。应用MTT法检测细胞增殖率;采用CYTO-ID荧光探针并运用荧光染色法和流式细胞术法对细胞自噬水平进行定性、定量检测;采用丫啶橙染色法检测细胞溶酶体pH值;运用实时定量PCR法和Western blot法检测LC3-Ⅱ和P62自噬相关基因和蛋白的表达水平。[结果]10、20μmol/L的1,4-BQ分别作用K562细胞24、48、72 h后,细胞相对增殖率明显降低(P<0.05)。CYTO-ID自噬荧光染料特异性聚集在K562细胞胞质内,随着染毒浓度增加荧光强度明显增强。流式细胞术结果显示,与对照组相比,5、10、20μmol/L 1,4-BQ组自噬水平均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。丫啶橙染色结果显示,不同浓度1,4-BQ组红色荧光强度均高于对照组,即1,4-BQ组溶酶体pH明显降低。Western blot结果显示,当1,4-BQ浓度为10、20μmol/L时,LC3-Ⅱ和P62蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05),且在染毒24 h时增幅最大。干预自噬后,与1,4-BQ组相比,1,4-BQ+LY294002组的自噬水平和LC3-Ⅱ蛋白表达量均降低(P<0.05)。与1,4-BQ组相比,1,4-BQ+CQ组自噬水平增加(P<0.05),而与CQ组的差异无统计学意义。此外,与对照组相比,CQ组LC3-Ⅱ蛋白表达明显增加(P<0.05)。与1,4-BQ组相比,1,4-BQ+CQ组LC3-Ⅱ蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]1,4-BQ可引起K562细胞LC3-Ⅱ、P62蛋白表达增加,可能是通过增加自噬体的合成和减少自噬体的降解从而增加细胞自噬。

【关键词】 自噬1,4苯醌K562细胞LY294002氯喹
【基金】 国家自然科学基金项目(编号:81373034,81573120)
【所属期刊栏目】 原创精选 (2018年05期)
  • 【DOI】10.13213/j.cnki.jeom.2018.17564
  • 【分类号】R114
  • 【下载频次】6
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