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过表达ADH1B基因HepG2.2.15细胞株的建立

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【作者】 冯薛烟丁向春雒夏董辉赵志军马丽娜海龙胡彦超

【Author】 FENG Xueyan;DING Xiangchun;LUO Xia;DONG Hui;ZHAO Zhijun;MA Lina;HAI Long;HU Yanchao;Ningxia Medical University;Department of Infectious Diseases,the General Hospital of Ningxia Medical University;Laboratory of Pathogenic Microorganisms,the General Hospital of Ningxia Medical University;

【通讯作者】 丁向春;

【机构】 宁夏医科大学宁夏医科大学总医院感染疾病科宁夏医科大学总医院病原微生物实验室

【摘要】 目的构建ADH1B慢病毒表达载体并建立ADH1B稳定过表达的人肝癌细胞株HepG2.2.15。方法根据ADH1B基因序列设计引物,PCR扩增并连接于GV492载体质粒交换转化DH5α感受态,选取阳性克隆转化子进行测序鉴定。采用三质粒系统包装ADH1B慢病毒载体转染293T细胞收集上清,测定滴度。感染人肝癌细胞HepG2.2.15,嘌呤霉素筛选得到过表达ADH1B的稳定细胞株,设立空白组、阴性对照组和过表达组,通过荧光显微镜观察各组GFP表达情况,并用Western blot及RT-qPCR从蛋白、mRNA水平对ADH1B基因表达进行检测。结果通过PCR、酶切鉴定及基因测序成功构建ADH1B过表达慢病毒载体,检测病毒滴度为2×109TU·mL-1。利用此病毒悬液感染HepG2.2.15细胞,成功筛选到ADH1B稳定表达的HepG2.2.15细胞株。Western blot及RT-qPCR结果显示:重组慢病毒载体LV-ADH1B能够有效感染HepG2.2.15细胞,与空白组和阴性对照组细胞相比,在过表达组细胞ADH1B m RNA和蛋白中表达量均升高。结论成功构建ADH1B基因的重组慢病毒载体LV-ADH1B,并筛选出稳定过表达ADH1B基因的人肝癌细胞株HepG2.2.15。

【基金】 国家自然科学基金地区项目(81760363);宁夏自然基金重点项目(2018AAC02014)
【所属期刊栏目】 论著 (2018年08期)
  • 【DOI】10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2018.08.001
  • 【分类号】R735.7
  • 【下载频次】47
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