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应用CRISPR/Cas9技术在杨树中高效敲除多个靶基因

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【作者】 刘婷婷范迪冉玲玉姜渊忠刘瑞罗克明

【Author】 Tingting Liu;Di Fan;Lingyu Ran;Yuanzhong Jiang;Rui Liu;Keming Luo;Institute of Resources Botany, School of Life Sciences, Southwest University;

【机构】 西南大学生命科学学院西南大学资源植物研究所

【摘要】 CRISPR/Cas9系统是一种广泛应用于细菌、酵母、动物和植物中的基因组定点编辑技术。本课题组在前期工作中利用该系统在毛白杨(Populus tomentosa Carr.)中率先实现了对内源基因—八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene dehydrogenase,PDS)基因的定点敲除。为研究靶点的设计和选择对该系统介导的杨树内源基因敲除效率的影响,本文分析了不同单向导RNA(Single-guide RNA,sg RNA)结合毛白杨PDS(Pt PDS)靶基因DNA序列后对突变效率的影响。结果发现sg RNA与靶基因间的碱基错配会导致突变的效率降低,甚至不能突变,其中3′端的碱基配对更为重要。进一步测序分析发现,该系统能同时敲除杨树基因组上两个同源的PDS编码基因(Pt PDS1和Pt PDS2),突变率分别达86.4%和50%。研究证明该系统可快速高效地敲除两个以上的内源基因,获得多重突变体杨树株系。利用该技术,本课题组已获得多个杨树转录因子及结构基因的敲除突变体株系,为将来开展基因功能研究和杨树遗传改良奠定了基础。

【基金】 国家自然科学基金项目(编号:31300990,31171620);中央高校基本科研业务费(编号:XDJK2014C062)资助
【所属期刊栏目】 研究报告 (2015年10期)
  • 【DOI】10.16288/j.yczz.15-303
  • 【分类号】S792.11;Q943.2
  • 【被引频次】27
  • 【下载频次】2498
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