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MEK抑制剂PD0325901显著提高猪胎儿成纤维细胞ssODN介导的HDR效率

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【作者】 欧浩李国玲王豪强黄广燕蔡更元李紫聪吴珍芳张献伟

【Author】 Hao Ou;Guoling Li;Haoqiang Wang;Guangyan Huang;Gengyuan Cai;Zicong Li;Zhenfang Wu;Xianwei Zhang;National Engineering Research Center for Breeding Swine Industry, College of Animal Science, South China Agricultural University;Wens Foodstuff Group Co., Ltd;

【通讯作者】 张献伟;

【机构】 华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心温氏食品集团股份有限公司

【摘要】 基因组DNA发生双链断裂(double strand break, DSB)后主要通过同源定向修复(homologous-directed repair, HDR)和非同源末端连接(nonhomologous end joining, NHEJ)两种途径进行修复,其中单链寡聚核苷酸(single-stranded oligodeoxyribonucleotide, ssODN)介导的同源定向修复是动物基因组常用的基因组定点修饰技术,具有较大的科研和应用价值。为提高猪基因组ssODN介导HDR效率,本研究以猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts, PFFs)为研究对象,利用丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase, MEK)抑制剂PD0325901培养细胞,研究其对HDR效率的影响及作用分子机理。结果显示,PD0325901能显著提高PFFs的G2期和S期细胞群百分比,减少G1期细胞群比率,促进HDR修复因子的表达。在最适浓度250 nmol/L时,PD0325901使ssODN介导的GFP报告载体的修复效率提高了58.8%;同时使PFFs基因组位点DMD和ROSA26定点修饰效率分别提高了48.16%和17.64%。本研究表明,MEK抑制剂PD0325901能显著提高猪基因组ssODN介导的同源定向修复效率,为高效制备定点基因修饰动物模型提供了新思路。

【基金】 国家自然科学基金项目(编号:31772555);国家转基因重大专项(编号:2016ZX08006002)资助~~
【所属期刊栏目】 研究报告 (2019年04期)
  • 【DOI】10.16288/j.yczz.18-294
  • 【分类号】Q78;R-332
  • 【下载频次】46
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