网络首发时间:2018-08-02 17:41:13

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利用Golden Gate “One-POT”技术组装运动发酵单胞菌转录单元

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【作者】 杨依伟赵彩芳吴波秦晗何明雄

【机构】 农业部沼气科学研究所,生物质能技术研究中心四川农业大学小麦研究所农业部农村可再生能源开发与利用重点实验室

【摘要】 为了研究运动发酵单胞菌合成生物学及代谢工程,和评估运动发酵单胞菌内源启动子及终止子,需要建立一种方便有效的多基因代谢途径组装方法,本研究通过Golden Gate方法构建了一个含有运动发酵单胞菌乙醇脱氢酶2编码基因启动子区(Padh2)及丙酮酸脱羧酶编码基因终止子区(Tpdc)和绿色荧光蛋白开放阅读框(gfp)的人工转录单元。将含有IIS型限制内切酶Bbs I识别和酶切序列的特异性接头添加到Padh2、Tpdc和gfp序列两侧,从而保证在一个反应体系中完成上述三个生物元件的酶切和连接,因此该技术被称作“One-POT”。插入上述人工转录单元的穿梭质粒导入大肠杆菌和运动发酵单胞菌后可检测到发出绿色荧光的细胞。本研究结果证实通过Golden Gate方法可有效组装转录单元所需DNA生物元件。本研究不仅为运动发酵单胞菌合成生物学和代谢工程研究,尤其是设计多基因代谢途径组装方面提供了技术工具,也为评估运动发酵单胞菌内源启动子和终止子提供了一种有效方法。(图5表2参34)

【基金】 中国农业科学院基本科研业务费(1610012016020,Y2017LM13,Y2018LM09和Y2018PT81);国家自然科学基金项目(31570055);四川省科技计划项目(17ZDYF1305)资助
  • 【DOI】10.19675/j.cnki.1006-687x.2018.04043
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】24

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