网络首发时间:2018-08-02 19:03:48

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一个硫化叶菌病毒启动子的分离与鉴定

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【作者】 何强杨昭杰季秀玲魏云林林连兵张琦

【机构】 昆明理工大学生物工程技术研究中心

【摘要】 很多研究已表明,几乎所有古菌病毒基因组中无RNA聚合酶(RNA polymerase,RNAP)等组成基本转录装置的同源蛋白编码序列,而且启动子活性对病毒感染过程中病毒基因的转录上可能具有重要的影响。为了进一步揭示古菌病毒基因启动子的序列结构特点和活性之间的关系,本研究首先基于硫化叶菌质粒pSeSD,将β-半乳糖苷酶编码基因lacS克隆到阿拉伯糖启动子araS下游多克隆位点,构建重组表达载体pSeSD-lacS。将pSeSD-lacS转化冰岛硫化叶菌(Sulfolobus islandicus)E233S菌株后的功能分析结果表明,lacS基因成功表达。在此基础上,利用硫化叶菌病毒STSV2衣壳蛋白编码基因ORF37上游500bp的潜在启动子片段P37替换pSeSD-lacS中的ara S启动子,构建出新的重组表达质粒pSeSD-P37-lacS,进一步将pSeSD-P37-lacS转化E233S菌株进行启动子活性分析。β-半乳糖苷酶酶活结果显示,诱导后ara S启动子酶活为14 345.7±422.3 m U,P37酶活为13 723.1±370.9 m U,表明P37片段具有启动子功能,而且活性与araS启动子相当。序列分析也显示,P37具有与硫化叶菌基因启动子类似的基础序列元件initiator、TATA-box及BRE等。这些结果表明,pSeSD–lacS可作为一个硫化叶菌病毒基因启动子筛选载体,而且高活性的基因启动子可能在STSV2病毒生命过程具有重要的作用。(图4表1参27)

【基金】 国家自然科学基金项目(31260034,31660454);云南省应用基础研究基金资助项目(KKSA201126005);教育部回国人员科研启动基金(KKQA201226003)资助
  • 【DOI】10.19675/j.cnki.1006-687x.2018.06015
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】4

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