网络首发时间:2019-03-15 09:05:39

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基于LAMP的病原菌一步等温可视化检测

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【作者】 丁盛陈刚毅李美王嘉钰陈蓉邹家尉杜凤董娟黄鑫崔欣唐卓

【机构】 中国科学院成都生物研究所中国科学院大学成都中医药大学

【摘要】 病原菌检测是环境监测、食品安全以及临床诊断中重要的研究手段,环介导等温扩增技术是病原菌等温检测的新兴技术,为实现病原菌的可视化检测,利用环介导的等温扩增技术结合灵敏的颜色指示剂对多种病原菌建立一步等温可视化检测。结果显示,基于LAMP的实时荧光分析能够特异性的检测铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7、阪崎肠杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌以及金黄色葡萄球菌。该方法的检测限低至能够检测体系中少于10个拷贝的菌样。其次,确定了以pH指示剂中性红作为可视化报告分子时的反应缓冲体系应含低于10 mmol/L Tris-HCl。通过将多种引物混合用于考察该方法在多重检测方面的可行性,结果表明该方法能够实现病原菌的五重检测。由此,本研究建立了一种适合于现场检测的一步等温可视化病原菌检测体系,该方法较传统方法更加简单,价格低廉,能够通过肉眼对检测结果进行判断,对实际应用具有重要意义。

【基金】 国家自然科学基金项目(21708037);中国博士后科学基金(2017M612998)资助
  • 【DOI】10.19675/j.cnki.1006-687x.2019.01041
  • 【分类号】R446.5

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