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荷载hTERT siRNA的条件增殖型腺病毒抑制肾癌生长的体内外实验研究

郑骏年孙方浩李望毛立军刘俊杰张宝福

江苏徐州医学院附属医院泌尿外科

摘要:目的研究荷载hTERT基因小干扰RNA的条件增殖型腺病毒(ZD-hTERT)对肾癌ketr-3细胞及其移植瘤的影响,为肾癌基因病毒治疗提供实验基础。方法1.ZD-hTERT、溶瘤腺病毒ZD-EGFP、表达hTERT-siRNA的增殖缺陷腺病毒AD-hTERT感染人肾癌ketr-3细胞。采用RT-PCR、蛋白印迹法检测hTERT表达;蛋白印迹法检测E1A表达;MTT检测细胞增殖;结晶紫检测细胞病变;TRAP-PCR检测端粒酶活性。2.建立裸鼠人肾癌移植瘤模型,移植瘤瘤体内分别注射病毒ZD-hTERT、ZD-EGFP、AD-hTERT及PBS,每周测量瘤体大小,观察其生长趋势;免疫组化和免疫荧光检测hTERT、E1A表达;TUNEL法检测细胞凋亡;组织病理切片检测肿瘤生长状况;裸鼠肝脏病理检测病毒毒性情况。结果1.体外研究结果表明对ketr-3细胞杀伤及增殖抑制作用强度依次为ZD-hTERT>ZD-EGFP>AD-hTERT>PBS;抑制hTERT表达以及对该细胞端粒酶活性的影响依次为ZD-hTERT>AD-hTERT>ZD-EGFP>PBS 2.在ketr-3细胞中ZD-hTERT、ZD-EGFP组有E1A蛋白表达,提示病毒复制。3.瘤内注射不同病毒7周后各处理组肿瘤的平均体积:PBS组为1552.1±206.4 mm~3,ZD-EGFP组为499.8±77.1 mm~3,AD-hTERT组为609.0±102.5 mm~3,而ZD-hTERT组仅为124.1±27.5 mm~3,ZD-hTERT与其它各组之间差异有统计学意义。4.hTERT蛋白免疫组化及免疫荧光显示:对hTERT蛋白表达抑制作用依次为ZD-hTERT>AD-hTERT>ZD-EGFP>PBS;免疫组化和免疫荧光在PBS组与AD-hTERT处理组未见E1A蛋白的表达,而ZD-hTERT、ZD-EGFP处理组发现大量E1A阳性信号,提示病毒复制;5.不同处理组移植瘤细胞凋亡阳性率依次为:ZD-hTERT处理组(76.7±6.8)%,AD-hTERT处理组(59.3±7.1)%,ZD-EGFP处理组(38.8±5.0)%, PBS处理组仅(2.9±2.7)%;6.肿瘤组织病理学显示PBS处理组细胞核内染色质松散,可见核仁,显示细胞增殖活跃,而ZD-hTERT,ZD-EGFP,AD-hTERT治疗组可见到不同程度的细胞核深染,很少见核仁,显示肿瘤组织生长抑制,在ZD-hTERT、ZD-EGFP发现部分坏死区域;各处理组肝脏HE染色未示异常。结论条件增殖型腺病毒ZD-hTERT可以在肾癌细胞及组织内选择性复制,并显著抑制肾癌ketr-3细胞及移植瘤hTERT表达,进而抑制其增殖、促进其凋亡。为应用于肾癌靶向性基因治疗奠定基础。
会议名称:

第五届中国肿瘤学术大会暨第七届海峡两岸肿瘤学术会议、国际肿瘤细胞与基因治疗学会会议、第二届中日肿瘤介入治疗学术会议

会议时间:

2008-09-19

会议地点:

中国河北石家庄

  • 专辑:

    医药卫生科技

  • 专题:

    泌尿科学; 肿瘤学

  • 分类号:

    R737.11

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