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同种异体肌腱玻璃化法冷冻保存的实验研究

【作者】 胡成栋

【导师】 张伯勋; 魏民; 郭义柱;

【作者基本信息】 中国人民解放军军医进修学院, 外科学, 2005, 博士

【摘要】 目的 筛选出适于鸡肌腱保存的溶液配比方案与保存程序,并对玻璃化法与低温冷冻法保存的肌腱进行细胞活性、羟脯氨酸含量、力学性能、免疫原性等方面的体外和体内移植的比较,以探讨玻璃化法保存异体肌腱临床应用的可行性。 方法 (1) 筛选与检测:运用正交设计和肌腱活性快速检测技术,筛选出适合鸡屈趾肌腱玻璃化保存和低温冷冻保存的溶液配比方案与保存程序。(2) 细胞培养:将玻璃化法保存鸡屈趾深肌腱进行细胞培养,观察培养后细胞的存活情况,并与新鲜肌腱和低温冷冻肌腱组进行对比,以了解玻璃化法保存肌腱的细胞活性。(3) 体外检测:将玻璃化法、低温冷冻法保存肌腱与新鲜肌腱进行形态结构观察、羟脯氨酸含量测定、力学性能检测,以了解“冷冻保存”对肌腱形态结构、胶原含量、力学性能的影响(4) 体内移植:应用玻璃化法保存的鸡屈趾深肌腱进行同种异体移植,分别于术后2、4、8、12、16周取材,观察移植后肌腱在形态结构、羟脯氨酸含量和力学性能等方面的变化,并与新鲜自体肌腱和低温冷冻异体肌腱进行比较,以了解玻璃化肌腱作为异体移植材料的可行性。(5) 玻璃化法保存半年的肌腱进行体外形态结构、羟脯氨酸含量和力学性能的检测,无菌状态的检测,以及异体移植后肌腱在形态结构、羟脯氨酸含量和力学性能等方面的变化,并与实验第三部分和第四部分的数据进行比较,以检验玻璃化法的稳定性。 结果 (1) 筛选与检测:应用酶消法测得新鲜肌腱活性为89.26%,玻璃化法优化组合所保存肌腱的活性为78.49%;低温冷冻法优化组合活性为49.63%。(2) 细胞培养:玻璃化肌腱培养所得细胞经鉴定为肌腱细胞,第8天细胞自组织块周边长出,21天后传代,细胞计数为1.15×10~6。低温冷冻肌腱培养所得细胞经鉴定也是肌腱细胞,第12天细胞自组织块周边长出,4周后传代,细胞计数为0.75×10~6。(3) 体外检测:玻璃化法较好地保存了

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