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小麦Pinb基因启动子区CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建

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【作者】 张淑娟张荣志宋国琦李玉莲高洁李玮高世庆李根英

【Author】 Zhang Shujuan;Zhang Rongzhi;Song Guoqi;Li Yulian;Gao Jie;Li Wei;Gao Shiqing;Li Genying;Crop Research Institute,Shandong Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Wheat Biology and Genetic Breeding in the Northern of Yellow and Huai Region,Ministry of Agriculture/Wheat and Maize National Engineering Laboratory;Beijing Hybrid Wheat Engineering Technology Research Center;

【通讯作者】 高世庆;李根英;

【机构】 山东省农业科学院作物研究所/农业部黄淮北部小麦生物学与遗传育种重点实验室/小麦玉米国家工程实验室北京杂交小麦工程技术研究中心

【摘要】 CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术已经逐渐成熟并在多种植物中得到成功应用,促进了基因功能的研究。小麦籽粒硬度是决定小麦加工品质的重要性状,Pinb是控制籽粒硬度的关键基因之一。本研究以小麦Pinb基因为对象,联合采用常规PCR和Golden Gate cloning技术,构建了包含小麦Pinb基因启动子区双靶点的CRISPR/Cas9基因编辑载体。将重组载体转入小麦原生质体中进行sgRNA活性的检测,在两个靶点位置均发生了突变,编辑效率分别为4. 57%和4. 37%,基因编辑类型包括碱基替换和碱基缺失。该研究为在小麦中实现Pinb基因的定点突变奠定了基础,对其功能研究和小麦品质改良均具有重要意义。

【关键词】 小麦CRISPR/Cas9基因编辑Pinb基因
【基金】 国家转基因生物新品种培育重大专项(2018ZX08009-10B);山东省农业科学院农业科技创新工程项目(CXGC2019G02);山东省农业良种工程项目(2019LZGC015);国家重点研发计划项目“主要农作物品质性状形成的分子基础”(2016YFD0100500)
【所属期刊栏目】 生物技术·遗传育种·种质资源 (2020年01期)
  • 【DOI】10.14083/j.issn.1001-4942.2020.01.001
  • 【分类号】S512.1
  • 【下载频次】191
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