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正交优化法建立沙打旺ISSR-PCR最佳反应体系

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【作者】 陈志宏黄琳凯张新全王志刚

【Author】 CHEN Zhi-hong et al (Center of Genetic Resources of Livestock,Foul and Herbage,China Animal Husbardry & Veterinary Institute,Beijing 100094)

【机构】 全国畜牧兽医总站畜禽牧草种质资源保存利用中心四川农业大学动物科技学院草业科学系全国畜牧兽医总站畜禽牧草种质资源保存利用中心 北京100094四川雅安625014北京100094

【摘要】 根据正交试验设计的原理,设计了探索性正交试验和细调性正交试验来确定沙打旺ISSR-PCR体系中各成分的浓度。得到既稳定又能扩出最多条带的适合沙打旺的ISSR-PCR最佳反应体系,即20μl的反应体系中含有1×buffer,dNTP 0.2 mmol/L,Taq酶1.0 U,引物0.3μmol/L,Mg2+2.5 mmol/L,DNA模板2.5 ng/μl。然后对沙打旺ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火试验,得到这条引物的最佳退火温度为54.1℃。这一最佳体系的建立为今后利用ISSR标记技术,研究沙打旺的遗传多样性提供了标准化程序。

【关键词】 沙打旺ISSR正交优化反应体系
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2006.13.020
  • 【分类号】S548;S55;Q943.2
  • 【被引频次】10
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