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PCV2·ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化

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【作者】 王宪文谢青梅曹永长于康震毕英佐

【Author】 WANG Xian-wen et al(College ofAnimal Science,South China Agricultural University,Guangzhou,Guangdong 510642)

【机构】 华南农业大学动物科学院基因工程室华南农业大学动物科学院基因工程室 广州广东510642河南科技学院动物科学院新乡河南453003广州广东510642

【摘要】 [目的]为了研究PCV2-ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化。[方法]用PCR方法扩增PCV2 ORF2基因3′端片段,PCR产物经酶切后与经同样处理过的pET32a质粒连接,构建重组质粒。重组质粒经PCR和酶切鉴定并测序后,转化BL21感受态细胞;重组菌液用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。[结果]ORF2基因在大肠杆菌中正确表达,表达的融合蛋白的分子量约为33 ku;在37℃、1 mmol/L浓度下,诱导时间为6 h时表达量最大,占细菌总蛋白的23.62%。表达产物主要以包涵体的形式存在,将包涵体溶解后过Ni-NTA柱纯化可得到较为纯净的目的蛋白。[结论]该研究为猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)和猪皮炎和肾病综合征(PDNS)等疾病的防治奠定了基础。

【关键词】 猪圆环病毒Ⅱ型ORF2表达
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2007年23期)
  • 【分类号】S852.65;Q78
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】120
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