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大肠杆菌原核表达载体pSBET-His的构建

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【作者】 陈正斌谭仲夏秦西云

【Author】 CHEN Zheng-bin et al(Yunnan Institute of Tobacco Science,Yuxi,Yunnan 653100)

【机构】 云南省烟草科学研究所云南省烟草科学研究所 云南玉溪653100云南农业大学植物保护学院云南昆明650201云南玉溪653100

【摘要】 为了构建原核表达载体pSBET-His。pSBETa质粒经XbaI和BamH I限制性内切酶双酶切,获得原核表达载体的骨架。以pET28a(+)为模板,通过高保真PCR法应用T7 promoter引物和T7 terminator引物对pET28a(+)载体T7表达区域进行扩增,PCR产物电泳纯化后经双酶切和纯化获得138 bp含His-Tag序列的片段。将pSBET原核表达载体骨架和含有His-Tag序列的片段进行连接后转入DH5α感受态细胞中,经菌落PCR及酶切筛选构建pSBET-His。成功构建了pSBET-His原核表达载体。应用该载体表达的蛋白质,可采用镍离子亲和层析法进行纯化。该研究为应用pSBET-His载体进行烟草丛顶病毒ORF4的原核表达研究奠定了基础。

【关键词】 原核表达载体pSBET-His构建
【基金】 云南省烟草公司科技项目(04A18)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2007年27期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.27.074
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】329
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