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传染性支气管炎病毒NP基因在大肠杆菌中的可溶性表达

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【作者】 郝春丽王泽霖王新卫姚慧霞周欣

【Author】 HAO Chun-li et al (College of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University,Zhengzhou,Henan 450002)

【机构】 河南农业大学牧医工程学院河南农业大学牧医工程学院 河南郑州450002河南郑州450002

【摘要】 [目的]生产具有生物活性的、可用于临床检测的NP融合蛋白抗原,建立可用于临床检测IB抗体诊断的试剂盒。[方法]利用RT-PCR技术扩增传染性支气管炎病毒M41株的NP基因,将之克隆并重组于原核表达载体pET-28a,经PCR、酶切鉴定及序列分析构建重组表达载体pET-NP,研究NP基因在大肠杆菌中的可溶性表达。[结果]将重组载体pET-NP转化表达菌BL21,获得阳性重组菌pET-NP-BL。阳性重组子经IPTG诱导后,目的基因NP获得了高效表达。表达产物经过SDS-PAGE与Western blot检测表明,NP分子量约为49 kD,且以可溶性蛋白形式存在;表达产物可与特异性传染性支气管炎病毒抗血清发生免疫反应。表达产物可以用作检测IB抗体的抗原。[结论]该融合蛋白可用于生产检测IB的诊断试剂,生物安全性高,生产方便。但尚需建立适当的检测方法,进一步研究其实际诊断价值。同时也可以研制新型IB重组亚单位疫苗,进一步研究其刺激动物机体产生的细胞与体液免疫,深入研究新功能,筛选新的抗原表位,为生产新型IB基因工程疫苗奠定基础。

【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2007年34期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.34.101
  • 【分类号】S852.65
  • 【被引频次】6
  • 【下载频次】109
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