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从Raji细胞克隆IL-10基因

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【作者】 陈其新劳风学李明

【Author】 CHEN Qi-xin et al(Henan Agricultural University,Zhengzhou,Henan 450002)

【机构】 河南农业大学北京市医药器械学校河南农业大学 河南郑州450002北京100012河南郑州450002

【摘要】 [目的]探索一种简便可行的白细胞介素-10(IL-10)基因的克隆方法。[方法]以人Burkitt’s淋巴瘤细胞系Raji细胞为材料,提取培养的Raji细胞中的总RNA。根据GenBank中人IL-10基因序列设计1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增人IL-10基因的编码cDNA。回收目的片段,将其与pMD18-T载体连接并转化到大肠杆菌感受态细胞DH5α,构建该基因的重组质粒。重组质粒经PCR和双酶切鉴定后进行测序。[结果]以骨髓细胞组织总RNA为模板进行RT-PCR,可从Raji细胞中获得了预期的约550bp特异性条带。成功构建了IL-10基因的重组质粒,PCR扩增和双酶切的鉴定结果说明该插入片段可能为IL-10cDNA。从获得的阳性克隆中挑选1个菌落来分析重组质粒的插入DNA片段序列。序列分析结果证实其与报道的IL-10基因的序列一致。[结论]该研究为IL-10的重组表达及其生物学活性分析奠定了基础。

【关键词】 IL-10Raji克隆序列分析
【基金】 河南省教育厅自然基金项目(2007230003);河南省科技攻关项目(052403011)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2007年36期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.36.034
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】50
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