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联合双基因表达载体的构建及其拟南芥转化

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【作者】 钟胜段瑞军郭建春胡新文符少萍

【Author】 ZHONG Sheng et al (Institute of Tropical Biotechnology,Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences,Haikou,Hainan 571101)

【机构】 中国热带农业科学院热带生物技术研究所中国热带农业科学院热带生物技术研究所 海南海口571101海南海口571101

【摘要】 [目的]为了研究CBF3冷诱导转录因子和细胞渗透调节物质AtGloS3在抗寒中的相互作用,寻找理想的抗寒转基因方式。[方法]根据GenBank中拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组序列设计引物,通过PCR反应克隆包括CBF3(C-repeat Binding Factor 3)基因以及基因上游启动子的DNA序列:CP-CBF3,共2 075 bp。CP是CBF3基因的启动子,受低温诱导。用EcoRI和BamHI双酶切CP-CBF3并置于植物表达载体pCAMBIA1300中,构建CBF3基因冷诱导表达载体pCA-CP-CBF3。然后将带有组成型启动子的肌醇半乳糖苷酶基因AtG-loS3合并于pCA-CP-CBF3中,构建双基因植物表达载体pCA-CP-CBF3-35S-AtGloS3。用真空抽滤虑法将这两个表达载体转化到拟南芥中,并用潮霉素筛选出转基因植物苗。[结果]CBF3和AtGloS3基因均来自拟南芥,而CBF3不存在内含子,AtGloS3基因存在内含子,故以CB-1、CB-2为引物的非转基因植物中也能得到带,而以AT-1、AT-2为引物的非转基因植物不能得到带。[结论]该研究中pCA-CP-CBF3是1个对照,实验的后续工作需进一步进行。

【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2008年01期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.01.004
  • 【分类号】Q943.2
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】503
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