节点文献

重组人神经生长因子β腺病毒的构建及鉴定

免费订阅

【作者】 冯波李青旺肖波韩增胜支旭勃

【Author】 FENG Bo et al (College of Animal Science and Technology, Northwest Agriculture and Forestry University, Yangling, Shaanxi 712100)

【机构】 西北农林科技大学动物科技学院燕山大学环化学院生物工程系西北农林科技大学动物科技学院 陕西杨凌712100陕西杨凌712100燕山大学环化学院生物工程系河北秦皇岛066004陕西杨凌712100鲁东大学生命科学学院山东烟台264025陕西杨凌712100

【摘要】 [目的]克隆带有His标签的人神经生长因子β基因(human nerve growth factor beta,hNGF"β),并构建hNGF"β与EGFP基因复制缺陷型腺病毒载体,为hNGF蛋白的表达、纯化及对其进行神经损伤的应用研究奠定基础。[方法]用Trizol试剂提取人胎肝总RNA,应用RT-PCR方法以自行设计的带有His标签的引物来扩增NGF"β基因;将所扩增的NGF"β基因经酶切、纯化,与IRES-EGFP片段共同插入到Pshuttle-cmv载体中,测序后,利用基因同源重组技术构建hNGF基因的复制缺陷型腺病毒载体AdNGF"β,经鉴定,转染HEK293细胞,观察EGFP表达并检测重组腺病毒的病毒滴度。[结果]克隆的hNGF基因序列与GenBank中的hNGF基因序列完全一致并在3′端携带上His标签;重组腺病毒载体AdNGF-β经PacⅠ酶切得到大于23.0和4.5或2.9kb大小的2个片段,表明同源重组成功。2种重组腺病毒经脂质体介导转染293细胞后,均可观察到绿色荧光蛋白。收获病毒并测定感染滴度分别为1.00×109和0.99×109pfu/ml。[结论]克隆了带有His标签的hNGF"β基因,并成功构建了重组腺病毒载体,为hNGF蛋白的表达、纯化及对其进行神经损伤研究奠定基础。

【基金】 河北省秦皇岛市科技局转基因动物生产基因工程药物研究项目(DO8)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2008年02期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.02.010
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】93
节点文献中: 

本文链接的文献网络图示:

浏览历史:
下载历史: