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刺梨RNA的有效提取及Actin基因片段的克隆

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【作者】 杨玉安华明刘明黄伟李德燕王立新刘厚宇李顺雨

【Author】 YANG Yu et al(Institute for Fruit Resources of Karst Mountain Region,Guizhou University,Guiyang,Guizhou 550025)

【机构】 贵州大学喀斯特山地果树资源研究所贵州大学喀斯特山地果树资源研究所 贵州贵阳550025贵州贵阳550025

【摘要】 [目的]为刺梨的分子生物学研究奠定技术基础。[方法]分别采用改进的CTAB-LiCl法和CTAB法提取刺梨果实中的总RNA和基因组DNA。对刺梨总RNA进行反转录,生成cDNA第1链。根据GenBank上的蔷薇科肌动蛋白(Actin)基因保守序列设计1对跨内含子引物Actin1和Actin2,以cDNA第1链和基因组DNA为模板进行RT-PCR扩增。将含有目的片段的凝胶进行回收纯化,克隆到PMD18-T载体上,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,选取带有目的片段的重组质粒进行测序和序列分析。[结果]将目的片段回收后克隆于T载体,可获得298 bpActin基因的cDNA序列。克隆所得核苷酸序列与蔷薇、桃和葡萄的核苷酸序列相似性达83%,与富士苹果、甜菜等的相似性也超过80%。刺梨Actin基因编码的氨基酸序列与梨的相似性最高(达97%),其次是葡萄、花生、大豆、棉花和马铃薯,而与水稻、拟南芥等的相似性也达90%以上。[结论]Actin基因跨内含子,用该Actin基因片段作内标可以减少DNA污染。

【关键词】 刺梨肌动蛋白克隆
【基金】 国家自然科学基金项目(30660114);贵州省自然科学基金项目(20062038)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2008年04期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.04.006
  • 【分类号】Q943.2
  • 【被引频次】5
  • 【下载频次】337
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