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连接方法对重组效率影响的比较研究

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【作者】 莫宁萍岳昌武刘坤祥凌锌

【Author】 MO Ning-ping et al (Central Laboratory of Zunyi Medical College, Zunyi , Guizhou 563000)

【机构】 遵义医学院中心实验室遵义医学院中心实验室 贵州遵义563000贵州遵义563000

【摘要】 [目的]为探索一种适于连接PCR产物和不同粘端的新方法。[方法]分别采用冻融法、割胶法、试剂盒法和牙签法连接PCR产物与质粒DNA以及酶切产物与质粒DNA,比较不同连接方法对重组效率的影响。[结果]采用冻融法和割胶法连接PCR产物与pMD18-T,其连接效率分别为94.00%和93.00%,略高于试剂盒法和牙签法。采用冻融法和割胶法连接酶切产物的重组效率分别为86.67%和88.00%,略高于试剂盒法和牙签法。牙签法简化了连接前DNA相关操作,具有较高的连接效率,完全能够满足普通连接反应,特别是粘端连接反应要求。[结论]割胶法具有很高的重组效率和转化效率,可以满足普通连接反应、文库构建对连接效率和转化效率的要求,具有一定的应用前景。

【关键词】 重组效率转化分子克隆体外连接
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2008年08期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.08.027
  • 【分类号】Q78
  • 【下载频次】112
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