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Brazzein基因的合成及pGAPZαA-Bra表达载体的构建

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【作者】 王长远张丽萍刘松财汤丹

【Author】 WANG Chang-yuan et al(Heilongjiang August First Land Reclamation University,Daqing,Heilongjiang 163319)

【机构】 黑龙江八一农垦大学吉林大学畜牧兽医学院吉林大学畜牧兽医学院 黑龙江大庆163319黑龙江大庆163319吉林长春130062

【摘要】 [目的]为Brazzein基因在酵母SMD1168中转化和表达奠定基础。[方法]利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)合成Brazzein基因,将其连接到pMD18-T载体上,构建克隆载体pMD18-T-Bra。分别用XhoI和XbaI限制内切酶对克隆质粒pMD18-T-Bra和酵母表达载体pGAPZαA进行酶切,并在T4DNA连接酶作用下,将回收的目的基因连接到pGAPZαA载体上,构建重组质粒pGAPZαA-Bra。[结果]通过PCR扩增获得了约188 bp的Brazzein类似物的编码序列,将其克隆到pMD18-T质粒,用XhoI和XbaI双酶切后,连接到pGAPZαA载体,成功构建了重组表达载体pGAPZαA-Bra。Brazzein基因其中各碱基未发生突变,整个表达载体阅读框正确无误。[结论]利用基因工程的方法生产Brazzein是可行的。

【关键词】 Brazzein克隆pGAPZαA-Bra表达载体
【基金】 黑龙江省自然基金项目(C200618);黑龙江省农垦总局科技攻关项目(HNKXIY-08-11A)
【所属期刊栏目】 植物生理·生化 (2008年15期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.15.024
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】150
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