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天冬酰胺酶胞外表达的初步研究

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【作者】 张志红王利群陈驷朱劼

【Author】 ZHANG Zhi-hong et al (Deptartment of Chemical Engineering,Jiangsu Polytechnic University,Changzhou,Jiangsu 213164)

【机构】 江苏工业学院化学工程系江苏工业学院化学工程系 江苏常州213164江苏常州213164

【摘要】 [目的]为降低L-天冬酰胺酶Ⅱ的生产成本提供依据。[方法]通过PCR反应扩增大肠杆菌JM109成熟区的L-天冬酰胺酶II基因(ansB),将扩增片段与pMD18-T载体连接,构建重组质粒pMD18-T-asp。对pMD18-T-asp与质粒pET-22b进行双酶切后,将它们连接起来,转化感受态细胞,筛选重组表达载体pET-22b-asp。利用重组表达载体pET-22b-asp转化BL21(DE3),并对其发酵条件以及分离、纯化工艺进行了初步研究。[结果]成功克隆长度为960 bp的L-天冬酰胺酶II基因。重组表达载体pET-22b-asp也构建成功,并在BL21中得到表达。在重组菌接入TB培养基后2 h加入IPTG、培养基的初始pH值为7.2、装液量为12%,L-天冬酰胺酶Ⅱ酶活最高。重组天冬酰胺酶的纯化收率为82%,比活力达196 U/mg。[结论]重组天冬酰胺酶的胞外表达大大简化了其分离步骤。

【基金】 江苏工业学院资助项目(ZMF04020105);常州市科技局资助项目(KYZ0603017C);镇江市科技局资助项目(KYZ0-603023C)
【所属期刊栏目】 植物生理·生化 (2008年16期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.16.026
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】1
  • 【下载频次】480
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