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pGEX-4T-1-cMC4R原核表达载体的构建与表达

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【作者】 巴彩凤聂茹

【Author】 BA Cai-feng et al(Experimental Animal Center,Liaoning Medical University,Jinzhou,Liaoning 121001)

【机构】 辽宁医学院实验动物中心

【摘要】 [目的]构建犬MC4R基因编码区的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。[方法]以Beagle犬基因组DNA为模板,经PCR技术扩增目的片段,利用LP Recco PCR克隆技术将目的片段直接重组到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化到E.coliDH5α,筛选阳性克隆,BamHI、XhoI酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性。将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC4R转化到E.co-liBL21内,经IPTG诱导后,利用SDS-PAGE检测犬MC4R蛋白的表达。[结果]成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC4R,经DNA测序证实插入序列与设计基本一致,只有777位碱基T变成了C,这是由于犬MC4R编码区存在的多态性引起,对表达的犬MC4R蛋白序列无影响。大肠杆菌诱导后表达出犬MC4R融合性蛋白。[结论]成功构建犬MC4R原核表达载体,此重组体能在E.coliBL21内表达犬MC4R融合蛋白,为进一步获取犬MC4R的单克隆抗体奠定物质基础,也为研究犬MC4R蛋白的结构和生理功能提供帮助。

【基金】 辽宁省教育厅基金(202172052)
【所属期刊栏目】 农业生物技术 (2008年23期)
  • 【DOI】10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.23.039
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】6
  • 【下载频次】622
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