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PRRSV Hn-1/06株GP5蛋白基因的克隆及表达载体的构建

卢高峰夏平安邱璜李伟娟王中明刘明莉

河南农业大学牧医工程学院

摘要:[目的]克隆PRRSVHn-1/06株GP5蛋白基因并构建其原核表达载体。[方法]根据PRRSV美洲株ATCC-VR2332的ORF5基因序列设计特异性引物,用RT-PCR方法从Hn-1/06株中扩增得到GP5蛋白基因的片段,与PTG19-T载体连接获得其阳性克隆PTG19-T-ORF5。以该基因片段为模板分别设计ORF5完整序列和删除信号肽的ORF5序列两条引物,进行PCR扩增,将目的片段与原核表达载体pET32a连接,并对其进行酶切鉴定。[结果]扩增得到GP5蛋白基因全长序列603 bp,编码200个氨基酸残基;具有3个潜在的N-糖基化位点和9个半胱氨酸;分子量为22.4 kD,等电点为8.550;双酶切pET32a-ORF5鉴定,结果与预期一致,证实重组质粒构建成功。[结论]成功构建了PRRSVHn-1/06株GP5蛋白基因的表达载体,为深入研究GP5蛋白的本质与功能及其致病性奠定基础。
  • DOI:

    10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.26.133

  • 专辑:

    农业; 理工A(数学物理力学天地生)

  • 专题:

    生物学; 畜牧与动物医学

  • 分类号:

    S852.65

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